Zellbiologische, biochemische und molekularbiologische Untersuchungen zur funktionellen Charakterisierung des zytosolischen Adapterproteins SKAP-HOM

Damit Lymphozyten ihre Effektorfunktion ausüben können, benötigen sie einen primären Stimulus, der über antigenspezifische Rezeptoren (T- oder B-Zellrezeptor) vermittelt wird, sowie kostimulatorische Signale, die durch Stimulation akzessorischer Rezeptoren wie CD28, CD2 etc. erzeugt werden. Die Ankopplung primärer und sekundärer Signale an intrazelluläre Signaltransduktionswege erfolgt durch transmembranöse und zytosolische Adapterproteine und führt letztendlich zur Auslösung einer zellulären Antwort. Zu den zytosolischen Adapterproteinen zählt auch das von unserer Arbeitsgruppe erstmals beschriebene und klonierte Molekül SKAP-HOM. In T-Zellen und anderen hämatopoietischen Zellen ist SKAP-HOM ein physiologischer Interaktionspartner des zytosolischen Adapterproteins SLAP-130. Darüber hinaus stellt SKAP-HOM ein Substrat für die Proteintyrosinkinase Fyn dar. Über die Rolle von SKAP-HOM während der Immunantwort ist bisher sehr wenig bekannt. Um seiner Funktion näher zu kommen, haben wir eine SKAP-HOM-defiziente Maus generiert. Die ersten experimentellen Daten zeigen, dass SKAP-HOM-defiziente Tiere einen B-Zellaktivierungsdefekt aufweisen, der sich darin zeigt, dass die BCR-vermittelte Proliferation fast vollständig aufgehoben ist. Im Rahmen des vorliegenden Forschungsvorhabens ist eine umfassende phänotypische und funktionelle Analyse des Immunsystems der SKAP-HOM-defizienten Maus geplant.

Cell biological, biochemical and molecular biological characterization of the cytosolic adapter protein SKAP-HOM

The induction of lymphocyte effector function after engagement of primary signals (via B cell receptor or T cell receptor) and secondary signals (via costimulatory receptors like CD2 or CD28) is based on the coordinated activities of diverse signal transduction pathways. Coupling of receptor mediated primary and secondary signals to intracellular transduction pathways is the main function of adapter proteins. We have recently cloned an ubiquitously expressed cytosolic adapter molecule, SKAP-HOM, that constitutively interacts with the cytosolic adapter protein SLAP-130/Fyb. In addition, SKAP-HOM is a substrate for protein tyrosine kinase Fyn. To elucidate the function of this adapter protein SKAP-HOM-deficient mice were generated. First experimental data showed a defect in B-cell activation of SKAP-HOM-/- mice. Purified B cells of SKAP-HOM-deficient and wildtype animals responded equally to mitogens. However, stimulation of purified B cells via the BCR revealed a significant decrease in proliferation of SKAP-HOM-deficient B cells. Therefore the present project will focus on the extensive functional analysis of the immune system in SKAP-HOM-deficient mice.