Struktur-Funktionsbeziehungen der Rod-Outer-Segment (ROS)-Guanylatzyklase mit dem Guanylatzyklase-aktivierenden Protein2 (GCAP-2)
Projektleiter:
Projektbearbeiter:
Dipl.-Pharm. Jens Pettelkau
Projekthomepage:
Finanzierung:
Das Guanylatzyklase-aktivierende Protein GCAP-2 reguliert Calcium-abhängig die membranständige Photorezeptor-Guanylatzyklase (ROS-GC). GCAP-2 ist ein N-terminal myristoyliertes EF-Hand-Protein. Störungen dieser Regulation führen zu degenerativen Retinopathien. Bisher existiert keine Struktur der ROS-GC. Genauso wenig wird die Bedeutung der Myristoylierung fur Struktur und Funktion von GCAP-2 und für seine Wechselwirkung mit der ROS-GC verstanden. Protein-Protein- und Protein-Lipid-Wechselwirkungen werden im Rahmen eines DFG-geförderten Kooperationsprojektes mit Hilfe kalorimetrischer und spektroskopischerMethoden (Dr. Christian Lange, Institut für Biochemie/Biotechnologie der MLU) untersucht. Detaillierte Informationen zu Struktur und konformationeller Dynamik des Komplexes sollen mit Infrarot-Reflexions-Absorptionsspektroskopie (IRRAS) und
Infrarotspektroskopie unter abgeschwächter Totalreflexion (ATR-IR) (Prof. Dr. Alfred Blume, Dr. Andreas Kerth, Institut für Physikalische Chemie der MLU) sowie mit Festkörper-NMR-Spektroskopie (Prof. Dr. Daniel Huster, Universität Leipzig) erhalten werden. Chemische Quervernetzung kombiniert mit hochauflösender Massenspektrometrie liefert Informationen über Abstände zwischen den interagierenden Wechselwirkungspartnern (Prof. Dr. Andrea Sinz, Institut für Pharmazie, MLU Halle). Das Ziel des Projektes ist die Erstellung eines Strukturmodells des funktionellen Komplexes aus ROS-GC 1 und GCAP-2 in der Lipidmembran.
Infrarotspektroskopie unter abgeschwächter Totalreflexion (ATR-IR) (Prof. Dr. Alfred Blume, Dr. Andreas Kerth, Institut für Physikalische Chemie der MLU) sowie mit Festkörper-NMR-Spektroskopie (Prof. Dr. Daniel Huster, Universität Leipzig) erhalten werden. Chemische Quervernetzung kombiniert mit hochauflösender Massenspektrometrie liefert Informationen über Abstände zwischen den interagierenden Wechselwirkungspartnern (Prof. Dr. Andrea Sinz, Institut für Pharmazie, MLU Halle). Das Ziel des Projektes ist die Erstellung eines Strukturmodells des funktionellen Komplexes aus ROS-GC 1 und GCAP-2 in der Lipidmembran.
Schlagworte
ATR-IR, Cross-Linking, GCAP-2, Guanylatcyclase (ROS-GC), IRRAS, ITC, Interaktion, Massenspektrometrie, NMR
Geräte im Projekt
- LTQ-Orbitrap-Massenspektrometer (ESI und Nano-ESI, ThermoFisher)
- Nano-HPLC-System
- MALDI-TOF/TOF-Massenspektrometer
- FPLC-System mit Fraktionssammler
- MALDI-TOF/TOF-Massenspektrometer (Ultraflex III, Bruker Daltonik)
- Nano-HPLC-System (Ultimate 3000, Dionex)
- Präparationsroboter für die offline-HPLC / MALDI-MS-Kopplung (Proteineer, Bruker Daltonik)
- Analytisches HPLC-System (Agilent 1200)
- UV/Vis-Spektralphotometer (GE Healthcare)
- Bilddokumentationssystem (BioRad)
Kontakt
Prof. Dr. Andrea Sinz
Martin-Luther-Universität Halle-Wittenberg
Naturwissenschaftliche Fakultät I
Kurt-Mothes-Str. 3a
06120
Halle (Saale)
Tel.:+49 345 5525170
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